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96T人巨噬細(xì)胞活化因子ELISA 檢測(cè)試劑盒使用的實(shí)驗(yàn)方案
更新時(shí)間:2012-11-23   點(diǎn)擊次數(shù):1107次

人巨噬細(xì)胞活化因子ELISA 檢測(cè)試劑盒


本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿

上海信然生物技術(shù)有限公司專業(yè)供應(yīng)葡聚糖凝膠HL-20,白介素elisa試劑盒,腫瘤壞死因子elisa試劑盒,人類白介抗原B27,細(xì)胞生長因子試劑盒,提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀真實(shí)性。我公司對(duì)試劑盒質(zhì)量100%保證,若存在質(zhì)量問題,我們無條件包退換 
 
試驗(yàn)原理:
    MAF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知MAF濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將MAF和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中MAF的濃度呈比例關(guān)系。
 
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人巨噬細(xì)胞活化因子ELISA 檢測(cè)試劑盒

操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
 

人巨噬細(xì)胞活化因子ELISA 檢測(cè)試劑盒

操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。
 
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人巨噬細(xì)胞活化因子ELISA 檢測(cè)試劑盒

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的MAF標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的MAF含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測(cè)值范圍:0-240pg/ml

4、敏感度: 0.1 pg/ml
p-GP/MDR/gp170 P-糖蛋白(抗體)
Mouse anti-human IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記小鼠抗人IgG
Mouse anti-rabbit IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記小鼠抗兔IgG
Mouse anti-rat IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記小鼠抗大鼠IgG
p-GP/MDR/gp170 P-糖蛋白(抗體)
PG-C(Pepsinogen C) 胃蛋白酶原C抗體
PGRN (progranulin) 顆粒蛋白前體抗體
PGRN (progranulin) 顆粒蛋白前體抗體
PHB(Prohibitin) 抑制素/腫瘤抑制因子抗體
PI3K/P85 alpha(Phosphatidyl inositol 3-kinase) 磷脂酰肌醇激酶抗體
PI3K/P85 alpha(Phosphatidyl inositol 3-kinase) 磷脂酰肌醇激酶抗體
Rabbit anti-MK IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記兔抗猴IgG
PI3K P110 alpha(Phosphatidylinositol 3 kinase catalytic alpha) 磷脂酰肌醇激酶PI3K P110 alpha抗體
PIBF(progesterone induced blocking factor) 孕激素誘導(dǎo)阻斷因子抗體
PIRH2(P53 induced RING-H2 protein) 泛素連接酶抗體
PIWIL1(piwi-like 1) piwi樣1蛋白抗體
PIWIL1(piwi-like 1) piwi樣1蛋白抗體

若需要了解試劑盒的詳細(xì)信息,請(qǐng)::謝
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上海通蔚生物科技有限公司

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地址:上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號(hào)3463室

主營產(chǎn)品:ELISA檢測(cè)試劑盒,ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,豚鼠ELISA試劑盒,兔ELISA試劑盒,羊ELISA試劑盒,牛ELISA試劑盒,雞ELISA試劑盒,鴨ELISA試劑盒

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