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免費(fèi)代測(cè)人缺血修飾性白蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒
更新時(shí)間:2014-01-07   點(diǎn)擊次數(shù):941次

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿

 

試驗(yàn)原理:

IMA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知IMA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。ELISA檢測(cè)試劑盒先將IMA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IMA的濃度呈比例關(guān)系。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

操作步驟

使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,ELISA檢測(cè)試劑盒甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

 

局限

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

 

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的IMA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的IMA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

 

3、ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)值范圍:0-80ng/ml

 

4、敏感度: 0.1 ng/ml

DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基A高糖、谷氨酰胺、丙酮酸鈉B高糖、谷氨酰胺C高糖、丙酮酸鈉D低糖、谷氨酰胺、丙酮酸鈉E無(wú)酚紅 Y74389 500毫升
RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)基A谷氨酰胺、高糖B丙酮酸鈉、HEPES、高糖C高糖、谷氨酰胺、HEPESD谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES Y74390 500毫升
胰蛋白酶(0.05%)乙二胺四乙酸混合液 Y74391 100毫升
胰蛋白酶(0.25%)乙二胺四乙酸混合液 Y74392 100毫升
乙二胺四乙酸(EDTA)細(xì)胞脫離溶液 Y74393 100毫升
Hanks平衡鹽緩沖溶液(HBSS) Y74394 500毫升
Hanks鈣鎂平衡鹽緩沖溶液(HBSS) Y74395 500毫升
Hanks鈣鎂平衡鹽緩沖溶液(HBSS)不含NaHCO3 Y74396 500毫升
10倍Hanks平衡鹽緩沖溶液(HBSS) Y74397 500毫升
標(biāo)準(zhǔn)磷酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液 Y74398 500毫升
鈣鎂磷酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液 Y74399 500毫升
10倍磷酸平衡鹽(PBS)緩沖溶液(0.1 M) Y74400 500毫升
*氨基酸補(bǔ)充溶液(1X) Y74401 100毫升
*氨基酸補(bǔ)充溶液(10X) Y74402 100毫升
青鏈霉素混合液 Y74403 100毫升
新生牛血清 Y74404 500毫升
無(wú)激素精制胎牛血清 Y74405 100毫升
胰蛋白酶中和液 Y74406 100毫升
細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)菌污染定性熒光檢測(cè)試劑盒 Y74407 20次
細(xì)胞培養(yǎng)病毒污染溶斑法結(jié)晶紫染色試劑盒 Y74408 20次
細(xì)胞培養(yǎng)病毒污染溶斑法中性紅染色試劑盒 Y74409 20次
通用型細(xì)胞培養(yǎng)污染性支原體屬鑒定16S rDNA PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒 Y74410 20 /50次

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