欧美,日韩在线视频-天天爽夜夜爽人人爽-无码一区二区三区在线观看-来一水AV@lysav

自1965年Gold等首先從人結(jié)腸組織發(fā)現(xiàn)一種蛋白質(zhì)，因這種抗原也在胎兒腸道中發(fā)現(xiàn)，因而稱為癌胚抗原(eaneino embryoniv antigen，CEA)。CEA屬于非器官特異性腫瘤相關(guān)抗原，分泌CEA的腫瘤大多位于空腔臟器，如胃腸道、呼吸道、泌尿道等。人癌胚抗原elisa試劑盒說明書CEA經(jīng)胃腸道代謝，而腫瘤狀態(tài)時CEA進人血和淋巴循環(huán)，引起血清CEA異常升高。在結(jié)腸癌檢測中 CEA是zui常用的腫瘤標(biāo)志物，但對于病變限于腸壁以內(nèi)者卻極少出現(xiàn)CEA升高，故CEA很難對結(jié)腸癌作早期診斷。80年代陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了CAI、和CA242，他們的zui大臨床價值是對胰腺癌的檢測，但也經(jīng)常把這兩種標(biāo)志物與CEA合用，以提高結(jié)直腸癌的診斷和治療水平。其中以CEA為的標(biāo)志物。
【原理】
    利用雙抗體夾心技術(shù)，將抗CEA的單克隆抗體包被于聚苯乙烯塑料珠上，制成固相抗體珠，用此珠去吸附樣品中的CEA，充分洗滌后再依次與酶標(biāo)記CEA抗體與底物反應(yīng)，以成色后的吸光度值從劑量反應(yīng)曲線查得樣品中的cEA含量。
【試劑】
    1.CEA標(biāo)準(zhǔn)液 用純化CEA配制為濃度分別為0、1.5、3.0、10.0、20.ong/ml系列標(biāo)準(zhǔn)液。
    2.CEA抽提液0.Zmol/L醋酸鈉緩沖液(pHS.0)。
    3.基質(zhì)應(yīng)用液取鄰苯二胺80mg溶于pHS.O磷酸一拘攤酸緩沖液50ml中，56℃水浴中助溶。*溶后加人新鮮的30%HZ認(rèn)20川，混勻。此基質(zhì)液呈無色透明液體，若顯不能使用。將此底物液貯于棕色瓶中，30而n內(nèi)用完。
    4.辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗CEA抗體。
    5.洗滌液0.osmol/LP贅(pH7.40)一0.1%Tween一20.
    6.抗CEA單克隆抗體包被的圓珠.
    7.待檢血樣血清(漿)。
【操作步驟】
    1.待檢抗原的制備取待檢血清或血漿0.sml，加0.Zmol/L醋酸鈉緩沖液
(pHS.o)1.oml，混勻后于70℃水浴內(nèi)15min。以3 000r/而n離心10而n。取上清液作
為3倍稀釋的待檢抗原。陽性對照品必須同步處理。
    2.在20孔反應(yīng)板上每孔中加人上述(*步操作)待檢抗原0.Zml。同時加人
CEA標(biāo)準(zhǔn)抗原及陽性對照抗原。每份樣品均作平行兩孔。
    3.用鑷子夾起CEA固相抗體珠，甩掉附著的液體后投人孔內(nèi)。反應(yīng)板上班蓋一張
干凈紙，將板漂浮于37℃水浴中反應(yīng)Zh。人癌胚抗原elisa試劑盒說明書注意勿蓋水箱蓋，反應(yīng)完成后可連續(xù)操作或
置4℃過夜。
    4.用PBS一Tween一20洗滌液洗滌3次。每次加入洗滌液后放置3而n再抽凈(負(fù)壓抽吸)洗液。zui后一次洗液放人后靜置至準(zhǔn)備加酶標(biāo)記抗CEA之前時再抽凈。
    5.二抗液制備 取每支凍干的酶標(biāo)記抗CEA抗體用蒸餾水1.Oml溶解，因凍干時加有明膠保護劑，溶解時須放置37℃水浴中l(wèi)min。待充分溶解后再按要求稀釋至zui適工作濃度。
    6.將孔中洗滌液抽凈，每孔加人酶標(biāo)記抗CEA工作液0.Zml，將反應(yīng)板用干凈紙覆蓋后再漂浮于37℃水浴中反應(yīng)2h，勿蓋水箱蓋。
    7.用PBS一Tween一20洗液洗滌4~5次。末次洗液放人后靜里至加基質(zhì)液前。
    8.將孔中洗液抽凈，把反應(yīng)板與裝有75mmX12mm試管的20孔紙盒按編號對好位置，翻轉(zhuǎn)反應(yīng)板使扣在紙盒上，將圓珠對號移人紙盒上的試管中，每管加人新鮮配制的底物應(yīng)用液0.3ml。另取一支干凈試管加基質(zhì)應(yīng)用液。.3ml，供測定吸光度時調(diào)零使用。避光，室溫中反應(yīng)30min。
    9.每管加人lmol/L HCI 2.0ml終止反應(yīng).
    10.于492nm波長處，1.0cm比色皿用空白管調(diào)零，測定吸光度(應(yīng)于終止反應(yīng)lh內(nèi)完成)。
【參考范圍】
    正常成人(96%~97%)血清CEA含量<2.5拌g/L;
    大量吸煙者(20%~40腸)>2.5拌g/L，有的甚至>5拌盯Lo
【注意事項】
    1.由于CEA提純和單克隆抗體制備的技術(shù)很復(fù)雜，目前臨床上多購買廠家生產(chǎn)的試劑盒進行測定.不同廠家生產(chǎn)的CEA診斷試劑，由于方法學(xué)及抗血清特異性的差異，測定值可能會有差別。不同批號的試劑嚴(yán)禁混合使用。試劑盒應(yīng)4℃存放，并避免強光照射。
    2.20孔反應(yīng)板及試管使用后，反應(yīng)板可用洗板機清洗;也可用水洗凈，后浸泡于硫酸一鉻酸洗液中，再經(jīng)自來水、蒸餾水沖洗干凈，干燥后可再次使用。
    3.基質(zhì)液配制與使用過程中，禁與金屬物品或其他氧化物接觸，不得使用塑料容器。
    4.受檢血清應(yīng)新鮮，避免反復(fù)凍融。
【臨床意義】
    1.測定胃液和唾液的CEA對胃癌的診斷較有意義。胃液中的CEA含量一般高于血清中含量的1.5~15.5倍，而且較血中CEA升高較早。如果血中CEA在高水平上波動，而胃血CEA比值>1，則有利于胃癌的診斷，預(yù)后不良。唾液中的CEA更高于胃液，唾液CEA顯著升高時與胃癌診斷的符合率高達90%.
    2.CEA是各臟器癌的廣譜腫瘤標(biāo)記物，特異性差，無助于各種腫瘤的早期診斷，但有助于鑒別腫瘤的良性和惡性。CEA測定可作為腫瘤手術(shù)成敗的檢測指標(biāo)，對腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷有一定的價值。
    3.高濃度的血清CEA含量與結(jié)腸癌相關(guān)，人癌胚抗原elisa試劑盒說明書但無早期診斷價值。CEA升高也見于腸梗阻、膽道梗阻、尿毒癥、胰腺炎、肝硬化、結(jié)腸或直腸息肉、潰瘍性結(jié)腸炎、局限性腸炎和潰瘍病。